液相色譜柱是液相色譜分離能力的核心部分，了解其化學(xué)性質(zhì)參數(shù)，學(xué)會正確使用可以避免一些不必要的麻煩，進(jìn)而提高實(shí)驗(yàn)人員的工作效率。
 

　　液相色譜分析柱化學(xué)性質(zhì)參數(shù)：
 

　　1、載碳量
 

　　載碳量是基質(zhì)表面鍵合相的比例，載碳量高，則保留增加，適合分析非極性化合物。
 

　　2、鍵合相
 

　　鍵合試劑不同，對化合物的選擇性不同，一般長鏈的烷基鍵合相(C18 C8)比短鏈的(C4 C3)穩(wěn)定;非極性的鍵合相比極性的鍵合相(-NH2)穩(wěn)定。
 

　　3、封端
 

　　用短鏈將裸露的硅羥基鍵合后封閉起來，以減少殘留的硅醇基，減輕待測組分與酸性硅羥基反應(yīng)而引起的色譜峰拖尾現(xiàn)象。尤其對于極性樣品而言，未封端處理的色譜柱分離效果較差。
 

　　4、硅膠基質(zhì)
 

　　硅膠基質(zhì)是通用的基質(zhì)，強(qiáng)度大，化學(xué)修飾容易，但使用的pH值范圍有限(一般為2—8，特殊修飾的可以達(dá)到1—12)。
 

　　5、聚合物基質(zhì)
 

　　聚合物基質(zhì)多為聚苯乙烯—二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂，化學(xué)穩(wěn)定，應(yīng)用pH范圍寬，具有更強(qiáng)的疏水性，對蛋白質(zhì)等樣品分離效果較好;但強(qiáng)度較小，有機(jī)溶劑可能導(dǎo)致聚合物溶脹而受損，批次重復(fù)性較差，商品化色譜柱不多，一般價格較貴。
 

　　液相色譜分析柱在使用前，至好進(jìn)行柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評價柱性能變化的參考。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同;另外，在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進(jìn)行(出廠測試所使用的條件是至合適條件)，只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性。
 

　　1、樣品的前處理：
 

　　a、至好使用流動相溶解樣品。
 

　　b、使用予處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。
 

　　c、使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。
 

　　2、流動相的配制：
 

　　a、流動相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中)。
 

　　b、流動相具有一定惰性，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外)。
 

　　c、流動相的黏度要盡量小，以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果;同時降低柱壓降，延長液體泵的使用壽命(可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。
 

　　3、流動相流速的選擇：
 

　　因液相色譜分析柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱，要追求更好柱效，至好使用更好流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml/min，對于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml/min為佳。